目前PCR實驗室建設(shè)要求至少應(yīng)該分為三個區(qū)域，即試劑準(zhǔn)備區(qū)、核酸制備區(qū)和PCR擴增區(qū)，如果要對擴增產(chǎn)物進(jìn)行開放性鑒定，如雜交、電泳等操作，原則需要增加第四個區(qū)。實驗室分區(qū)的主要目的是避免純化核酸和擴增產(chǎn)物逆向污染前一個區(qū)域，但多年的經(jīng)驗表明，無論是三區(qū)還是四區(qū)的設(shè)置，似乎都沒有完全杜絕實驗室污染的發(fā)生。
反而羅氏COBAS“一體機”引入實驗室后，乙肝20IU/ML的敏感性能夠長期保持良好，極少有系統(tǒng)污染的發(fā)生，實驗室分區(qū)的意義受到一定程度的質(zhì)疑！仔細(xì)對比就不難發(fā)現(xiàn)，羅氏COBAS并不能避免樣本交叉污染，因為這一環(huán)節(jié)是由實驗室工作人員完成的，是管理問題而不是檢驗問題；COBAS在核酸制備過程中，經(jīng)常發(fā)生核酸純化的Tip頭吹出氣泡和氣泡破裂的情況，雖然這種情況并不常見，但核酸純化和試劑分配共用一個空間是事實，有研究報道，COBAS檢測28個樣本，有2個污染（JCM, 2011,P2854-2858），我們也從21個陰性樣本中發(fā)現(xiàn)一個污染，COBAS的污染就像普通實驗室一樣存在，但令人驚奇的是，從未像普通實驗室那樣發(fā)生系統(tǒng)性污染，但有一點可以說明，氣溶膠或許并不是實驗室污染的主要原因。
分析我國大多PCR實驗室的檢測項目不難發(fā)現(xiàn)，近80%的實驗室采用熒光PCR試劑盒進(jìn)行臨床檢測，即這部分實驗室不存在開放性核酸鑒定環(huán)節(jié)，試劑工作液的配制多在核酸制備完成后進(jìn)行，依存“試劑配置與PCR擴增之間的時間越短越好”的原則，多數(shù)實驗室的試劑配制均在核酸制備室完成，也就是說，試劑配制室的存在基本被忽視，了解了羅氏COBAS的操作方式，這種做法便顯得無可厚非！核酸制備完成并加入PCR反應(yīng)液后，移管到擴增室，由于采用封閉核酸鑒定的方法，這樣擴增室的設(shè)置也同樣顯得多余！以羅氏COBAS為鏡，臨床PCR實驗室是否分區(qū)便顯得無足輕重了！但這并不是說PCR實驗室不需要分區(qū)，因為儀器自動化控制的機械臂，與實驗室操作人員的操作習(xí)慣和對規(guī)則的執(zhí)行力是有著本質(zhì)差別的！這或許就是經(jīng)過嚴(yán)格分區(qū)后的實驗室，污染同樣存在的主要原因！
那么PCR實驗室究竟應(yīng)如何建設(shè)才能有利于污染的預(yù)防和有效清除？
其實污染就是PCR擴增管中摻入了原來樣本不存在的擴增核酸，那么這個不受歡迎的核酸是怎么來到PCR擴增管里的？如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環(huán)節(jié)，核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實驗室建設(shè)應(yīng)該重點考慮的環(huán)節(jié)。
實驗室的建設(shè)首先要有通風(fēng)設(shè)置，通風(fēng)是PCR實驗室建設(shè)應(yīng)該考慮的基本條件，如果采用封閉彩鋼板建設(shè)的實驗室，應(yīng)進(jìn)行壓差設(shè)置，即自試劑準(zhǔn)備室、核酸制備室到擴增室依次呈負(fù)壓，但清潔新風(fēng)應(yīng)從室外引進(jìn)，新風(fēng)過濾網(wǎng)應(yīng)定期更換，否則便成為污染的來源。其次是實驗室墻面和地面具有防水功能，也就是墻面和地面可以水洗！每個房間設(shè)置地漏，方便“實驗室的清潔”，當(dāng)實驗室污染發(fā)生時，即可使用“水洗實驗室”的方法有效清除污染，清除過程使用的是0.2%有效氯溶液，它不但有效斷裂核酸片段，而且還具有淬滅熒光基團(tuán)，有利于PCR實驗室熒光本底的去除。但過量使用反而會影響試劑擴增效率。消毒液清洗后應(yīng)該使用自來水或清潔水進(jìn)行再次清洗，特別是設(shè)備表面。實驗室空氣中的污染清除，可以用有效氯溶液進(jìn)行噴霧。
總之，PCR實驗室過度分區(qū)和分割，不但浪費空間，影響人員操作，常常不利于污染物的擴散和清除，相信在不久的將來，隨著試劑盒技術(shù)的發(fā)展，一個房間可實現(xiàn)PCR的試劑準(zhǔn)備、核酸純化和PCR擴增的所有功能，而污染的預(yù)防和清除也會顯得十分簡單。
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